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Órgão Oficial de Divulgação Científica da
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ISSN: 1679-1796
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Reação Tecidual Associado ao Implante de Tela de Poliglactina 910 em Camundongos: Estudo Histopatológico com Parâmetros Imunohistoquímicos
Tissue-Implant Reaction Associated with Poliglactin 910 Mesh in Mice: Histophatologic Study with Immunohistochemical Parameters
Renato Andretto, Luiz Celso Mattosinho França, Hernán Escobar Torrico, Ricardo Gomes Camacho
Trabalho realizado no Serviço de Cirurgia Experimental do HSPE-IAMSPE
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A presente investigação visa avaliar os efeitos da aplicação de tela de poliglactina 910
(Vicryl®) região torácica de
27 camundongos, estudando a reação inflamatória promovida pela mesma sobre as estruturas biológicas. Foi
empregada coloração convencional através de hematoxilina-eosina, reticulina e tricrômio de Masson. Imunohistoquímica foi usada para
estudar os macrófagos (CD68) e músculo liso (HHF35 e desmina). Todos os cortes foram examinados sob luz polarizada. Reação
inflamatória aguda foi observada nos 3 primeiros dias, seguido por formação de proliferação histiocitária e progressiva reação tipo corpo
estranho (granulomas) no tempo restante analisado. Observa-se desaparecimento das estruturas da tela no período após 120 dias.
Conclui-se que a tela de poliglactina 910 não constitui material inerte. O presente estudo demonstra que a tela de poliglactina 910 é
absorvida precocemente e, progressivamente, envolvida por reação tipo corpo estranho.
Palavras-chave: Telas cirúrgicas, Poliglactina 910, Imunohistoquímica, Granuloma de corpo estranho, Patologia clínica.
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The present investigation studies the surgical application of polyglactin 910
(Vicryl®) mesh in thoracic wall of
27 mice. The histologic examination used conventional hematoxiline-eosin, reticulin and Masson
stains. Immunohistochemistry was used to study macrophages (CD68) and smooth muscle (HHF35 and Desmin). All sections were
examined also under polarized light. Acute inflammation was observed in the first three days, followed by progressive foreing body reaction
in the remainder of the study. Mesh structures disappear in 120 days. Polyglactin mesh does not consist inert material. The
present material shows that polyglactin 910 mesh is absorbed being, progressively, circunscribed by foreing body reaction.
Key words: Surgical Mesh, Polyglactin 910, Immunohistochemistry, Foreign-body granulomas, Clinical Pathology.
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Andretto R., França L.C.M. França, Torrico H.E., Camacho R.G. Reação Tecidual Associado ao Implante de Tela de Poliglactina 910 em Camundongos: Estudo Histopatológico com Parâmetros Imunohistoquímicos. Rev bras videocir 2007;5(3):128-133. |
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Recebido em 01/07/2007 |
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Aceito em 09/07/2007 |
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presente investigação científica
tem por objetivo estudar os efeitos da aplicação de telas assim
consideradas absorvíveis sintéticas, compostas na sua
totalidade de fios sintéticos e multifilamentares de
Poliglactina 910, cuja arquitetura configura tela definida
por macroporos.
Em se tratando de fios absorvíveis
sintéticos, multifilamentares, leva-se em consideração
que estes elementos podem se apresentar de
diferentes calibres, também na confecção das telas.
Suas malhas, da mesma maneira têm porosidades
de diferentes dimensões.
Estruturas sintéticas com calibres
variáveis são selecionadas de acordo com a região que
irão sustentar, assim como com a tensão ou
trauma mecânico, seja por distensão ou mesmo por
pressão de sustentação.
Na fabricação das telas sintéticas,
é necessário que sejam definidas medidas padrões
para que se possam estabelecer o envolvimento da dependência (envolvimento e integração)
do biomaterial. A fim de avaliar os tipos de
reações celulares e histológicas, sugere-se um amplo
estudo anatomopatológico.
A intensidade e a duração dessas
reações podem estar condicionadas a um equilíbrio
precário entre o elemento estranho e o hospedeiro,
restrita ao sítio de contato, e assim não determinar
reações sistêmicas.
Teoricamente as telas constituídas por
fios sintéticos, multifilamentares, absorvíveis
devem traduzir reações inflamatórias locais de
pouca expressão histológica. Sua biocompatibilidade
deve, portanto, deve ser relacionada a
parâmetros estabelecidos pela sua reação histológica.
Acreditando que as alterações
histológicas podem se modificar de acordo com as
diferentes regiões anatômicas, testou-se experimentalmente
o referido biomaterial em diferentes regiões.
Assim, são analisadas as reações locais onde os
parâmetros anatomopatológicos, de observação e
quantificação, obedecem a uma investigação seqüencial ligada
ao tempo de evolução, a partir da aplicação
cirúrgica desta tela.
MATERIAIS E MÉTODOS
Animais
Na presente investigação foram
utilizados camundongos machos albinos da raça
Swiss, procedentes do biotério do Instituto Adolfo
Lutz, São Paulo, com peso estimado em
aproximadamente 40 gramas. Os animais foram tratados, durante
todo o experimento, de acordo com a
legislação brasileira vigente (Leis n.º 6.638 de 1979 e nº
9.605 de 1998), normas internacionais sobre experimentação animal, princípios éticos
adotados pelo Colégio Brasileiro de Experimentação
Animal (COBEA) e princípios básicos do
código internacional (International Guiding Principles
for Biomedical Research Involving Animals,
1985). Receberam ração Labina (Purina do Brasil, Ltda)
a cada 12 horas e água ad libitum e foram acondicionados em gaiolas coletivas. As
cirurgias foram realizadas no laboratório do Serviço
de Cirurgia Experimental do HSPE-IAMSPE.
Biomaterial
Telas de Poliglactina 910
(Vicryl®, Ethicon Inc., EUA) estéreis, na medida aproximada
de 5x5mm, foram empregadas.
Anestésico
O anestésico administrado foi o Zoletil
50 (Virbac do Brasil Indústria e Comércio Ltda,
São Paulo, SP), uma associação de cloridrato
de Tiletamina 125mg, cloridrato de Zolazepam
125mg, na dosagem de 0,1ml diluído em 0,9ml de
água destilada.
Histopatológico
O material colhido foi fixado em formalina a 10% e processado histologicamente com
inclusão em parafina, cortes histológicos de 5 micra.
As colorações empregadas foram
hematoxilina-eosina, reticulina, Giemsa, tricrômico de Masson.
Testes imunohistoquímicos foram também empregados.
Captura de Imagens
A microscopia foi realizada em fotomicroscópio Zeiss (Carl Zeiss
Oberkuchen, Alemanha) com acessório para polarização,
acoplado a câmara de televisão (Samsung
SDC 312, conectado a microcomputador AMD
SEMPRON, com placa de captura de imagem Brooktree Bt
848 (Zoltrix, EUA).
Metodologia
No estudo foram operados 27 animais divididos em 2 grupos conforme o tempo
de observação de resposta inflamatória, divididos
da seguinte maneira:
Grupo A (inflamação aguda) - constituído de
6 grupos de 3 animais cada (total de 18 animais), observados no período que variou de 24 horas
até 30 dias para necropsia e anatomia patológica;
Grupo B (inflamação
crônica) - constituído de 3 grupos de 3 animais cada (total de 9
animais), observados no período de 60 a 120 dias para
necropsia e anatomia patológica.
Os animais receberam a sigla CTV (C- Camundongos, T- Tela, V- Vicryl), divididos
nos grupos estudados.
Técnica Cirúrgica
Os animais foram operados sob anestesia geral através de administração de
Zoletilâ, administrado por via intramuscular, em
membro pélvico, na dose descrita.
Realizado a assepsia com iodopovidona 10% solução alcoólica aplicada na região dorsal. A
incisão foi feita na linha mediana dorsal torácica,
atingindo aproximadamente 10 mm, interessando pele,
tecido celular subcutâneo até alcançar a
aponeurose. Realizada dissecação no plano entre a aponeurose
e a musculatura torácica, à esquerda da linha
mediana. Através desta incisão, no plano entre a aponeurose
e a musculatura foi colocada a tela de poliglactina
910 (medindo 5x5mm), sendo fixada com pontos de
fio de polipropileno 4-0, usando o mesmo fio para
o fechamento da pele em pontos separados.
Tempo de Observação Pós-Operatório
Após serem submetidos à
intervenção cirúrgica, os animais foram colocados em
gaiolas separadas, identificadas de acordo com o grupo
de inflamação: aguda ou crônica.
O grupo A recebeu a designação de
CTV constituída do número 1 a 18, enquanto os
animais para o grupo B foram identificados de CTV de 19 a 27.
O tempo de observação para o grupo A
foi: 24 horas, 3 dias, 5 dias, 14 dias e 30 dias. Para
o grupo B foi de 60 dias, 90 dias e 120 dias (3
animais para cada período observado).
A alimentação dos camundongos foi reiniciada imediatamente após a
recuperação anestésica, sendo administrada a cada 12 horas
com ração Labina (Purina do Brasil, Ltda _ São Paulo)
e água ad libitum.
Eutanásia e Retirada das Peças
A eutanásia foi realizada através do
emprego de éter, cada animal distante dos demais, sendo
a peça retirada de imediato, constituída de
pele, tecido celular subcutâneo, aponeurose, tela
e músculo torácico (até gradil costal), com
margem de segurança ampla.
As peças foram colocadas em frascos individuais e identificadas, com formaldeído a
10%, rotuladas com as siglas CTV e respectivos
números, e encaminhadas ao estudo histopatológico.
Método de Coloração
Após fixação, o material coletado
foi submetido à inclusão em parafina. Os cortes
foram corados pelas técnicas de
hematoxilina-eosina, reticulina, Giemsa e tricrômico de
Masson.
Os estudos imunohistoquímicos foram realizados em lâminas salinizadas pela técnica
de streptoavidina-peroxidase. Foram usados os seguintes anticorpos: 1) CD 68 para
identificação de macrófagos (anticorpo monoclonal, clone
KP1, DAKO, título 1:100); 2) HHF-35, para
identificação de actina de músculo (clone HHF35, DAKO,
título 1:300); 3) Desmina, para identificação de
músculo liso (anticorpo monoclonal, clone D33, DAKO,
título 1:100).
RESULTADOS
Análise Histopatológica
As peças obtidas dos animais dos grupos
A e B, de acordo com os períodos programados,
foram analisadas através da avaliação histopatológica
com emprego de coloração de hematoxilina-eosina
e emprego de luz polarizada com colorações
específicas, encontrando-se os seguintes dados:
Grupo A
Em 24 horas: foi observado na microscopia óptica e com o emprego de luz polarizada
discreta reação inflamatória, fragmento de tela no
interior da cavidade de material amorfo circundada por
fibrina e neutrófilos (bolsa de neutrófilos), além do
tecido adjacente com edema e exsudação de
neutrófilos. Encontrou-se exsudação intensa com
microfilamentos birrefringentes no interior do exsudato, invisíveis
a hematoxilina-eosina (Figura-1).
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Figura 1- CTV 2: Luz polarizada - Inflamação aguda, filamentos birrefringentes. (aumento 100X) |
·3o dia: foi encontrada a tela no interior
das cavidades, reação inflamatória aguda e
proliferação histiocitária focal em músculo estriado. Presença
de úlcera na pele com exsudato inflamatório e
cavidade contendo o exsudato inflamatório, com
intensa quantidade de fibras birrefringentes e presença
de mastócitos (Figura-2).
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Figura 2- CTV 4: Reação granulomatosa ao redor de filamentos. (aumento 100X) |
·5o dia: observou-se que a tela no
interior da cavidade apresentava discreta reação
inflamatória aguda predominantemente reação
histiocitária. Havia células gigantes tipo corpo
estranho ao redor de microfilamentos que são
abundantes (multinucleares). Não havia formações
birrefringentes a hematoxilina-eosina. No uso de
luz polarizada, houve intensa quantidade de fibras birrefringentese presença de mastócitos.
·7o dia: presença de grande quantidade
de células gigantes (bolsa de células gigantes),
com numerosos filamentos birrefringentes em meio a material fibrinoso, com intensa reação
histiocitária e exsudação inflamatória. Houve presença de
tela em grande quantidade, além de aumento
de mastócitos e regeneração epitelial (Figura-3).
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Figura 3- CTV 10: Luz polarizada - Filamentos birrefringentes em meio de reação granulomatosa. (aumento 100X) |
·14o dia: presença de proliferação
histiocitária intensa, com numerosos microfilamentos
e presença de células gigantes em grande
quantidade, além de presença de moderada quantidade
de fibroblastos.Encontrou-se moderada quantidade
de histiócitos e evolução para grande quantidade
de mastócitos (Figura-4).
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Figura 4- CTV 14: Luz polarizada - granuloma. (aumento 100X) |
·30o dia: zona de fibroblasto abaixo do
tecido muscular estriado. No meio da fibrose presença
de células gigantes tipo corpo estranho e raras
fibrilas (fios). No derma observa-se foco de
calcificação, não havendo fibras refringentes remanescentes.
Há presença de grande quantidade de mastócitos.
Grupo B
60o dia: na pele, tecido celular
subcutâneo não há evidência de fibrose, sem
infiltrado inflamatório crônico no derma e tecido
celular subcutâneo. Porém abaixo do tecido
muscular estriado há discreta fibrose, com nódulos
fibróticos isolados e reação inflamatória crônica. Não
há material birrefringente e sim resto de granuloma
de corpo estranho, com cavidade desprovida de conteúdo - bolsa de células gigantes com
discreta quantidade de mastócitos e fibroblastos (Figura-5).
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Figura 5- CTV 20.2: Filamentos em meio a reação granulomatosa. (aumento 100X) |
·90o dia: microfocos de grânulos
calcificados, além de escassa quantidade de células tipo
corpo estranho (bolsa de células gigantes em
pequena quantidade), com poucos focos de fibrose.
Há presença de grande quantidade de
mastócitos, moderada para grande quantidade de
fibroblastos. No derma encontramos histiócitos, células
gigantes, demonstrando reação inflamatória crônica
(Figura-6).
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Figura 6- CTV 22: Reação inflamatória periférica. (aumento 100X) |
·120o dia: houve presença de discreta
fibrose perivascular com nódulos fibróticos, com
raras células gigantes com calcificação (não há
grânulos), além de inflamação crônica. Moderada
quantidade de mastócitos e fibroblastos.
Achados Histológicos e Imunohistoquímicos
A coloração pelo CD68 mostrou
positividade em histiócitos e células gigantes em todos em
todos os casos, após a fase exudativa. As colorações
pela Desmina e HHF-35 não forneceram
resultados relevantes, não havendo demonstração de
proliferação de músculo liso.
DISCUSSÃO
Comparado aos estudos de Spector e
cols1-7, a análise quantitativa da emigração de
leucócitos na inflamação granulomatosa, encontra
coerência. Foi observado ao 3o dia a presença de
vacúolo central com infiltração histiocitária e
de macrófagos, típicos de processo inflamatório
rápido, semelhante ao estudo acima citado. Nos dias 5 e
7 houve extensa infiltração de
infiltração histiocitária, semelhantes ao encontrado
nos estudos de Spector1. Ao
14o. dia observamos o início de células de inflamatórias crônicas,
também relatado em outros
trabalhos8-10. Na
evolução crônica, observamos uma redução importante
de polimorfonucleares e aumento de mastócitos, o
que corresponde à cicatrização crônica.
Fibrose e proliferação mastocitária
e fibroblástica também foram identificadas. Entre
o 14o e o 30o dia houve desaparecimento de
material birrefringente, o que sugere ter ocorrido
uma provável absorção de todo o material além
de cronificação da reação de corpo estranho.
CONCLUSÕES
Existe reação de corpo estranho
provocada pela tela de poliglactina 910, tanto na fase
aguda quanto na crônica, não havendo presença
de calcificação. Porém, notam-se focos de fibrose.
No período entre o 14o e
30o dia verificou-se a absorção da tela, restando apenas
tecido cicatricial. Estes dados podem sugerir que a
cicatriz tecidual, mesmo reforçada pela tela, poderá
não resistir à tensão e pressão advindas das
estruturas anatômicas intra-abdominais.
Referências Bibliográficas
1. Spector W.G. The acute inflammatory response.
Ann. N.Y. Acad. Sci 1964;116:749.
2. Spector W.G., Willoughby D.A.. Vasoactive amines
in acute inflammation. Ann NY Acad Sci
1964;116:839-846.
3. Spector W.G et al. A quantitative study of
leucocyte emigration in chronic inflammatory
granulomatosis. Journal Path Bact 1967;93:101.
4. Spector W.G.. The cytokinectics of chronic
inflammation. Sciences Basis Med. Ann. Rev. 1967;163.
5. Spector W.G.. The granulomatous
inflammatory exsudate. Int Rev Exp Pathol 1969;8:1-55.
6. Spector W.G. Recent advances in the study of
leucocyte emigration. Br J Dermat 1969;81:Suppl 3:19-27.
7. Willoughby D.A., Spector W. G. The lymph
node permeability factor: a possible mediator of the
delayed hypersensitivity reaction. Ann NY Acad Sci 1964;116:874.
8. Rosch R., Junge K.,Schachtrupp A., Klinge
U., Klosterhalfen B., Schumpelick V.. Mesh implants in
hernia repair. Inflammatory cell response in a rat model.
Eur Surg Res 2003;35(3):161-166.
9. Klinge U., Klosterhalfen B., Brikenhanuer V, Junge
K., Conze J., Schumpelick V.. Impact of polymer pore size
on the interface scar formation in a rat model. J Surg
Res 2002;103(2):208-214.
10. Laschke M.W., Häufel J.M., Thorlacius H., Menger
M.D. New experimental approach to study host tissue
response to surgical mesh materials in vivo. J Biomed Mater Res
Pt A 2005;74(4):696-704.
Endereço para correspondência
RICARDO GOMES CAMACHO
R. Jaboticabal n.o 71 apto 42
Mooca - São Paulo-(SP) - Brasil
CEP: 03188-000
E-mail: ricardocamacho@ig.com.br